해피레포트 - 전기 영동 결과 Report

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보고서설명
플라스미드 DNA와 PCR 생산물을 전기영동을 통해 확인하는 실험

본문일부/목차
Ⅰ. 기본정보 Ⅱ. 서론 (Introduction) 1. PCR (polymerase chain reaction) 1-1. PCR의 원리 1-2. PCR의 과정 1-3. PCR의 주재료 2. PCR 결과 확인 (전기영동, electropH oresis) 3. 전기영동의 종류 3-1. 이동 계면 전기영동법 (Moving boundary electrophoresis) 3-2. 띠 전기영동법 (Zone electrophoresis) 3-3. 불연속 젤 전기영동법 (Disc-gel electrophoresis) 3-4. SDS젤 전기영동법 3-5. 아가로오스 젤 전기영동법 (Agarose gel electrophoresis) Ⅲ. 실험재료 및 방법 (Materials & Methods) 1. 실험재료(Materials) 2. 실험 방법(Methods) Ⅳ. 실험결과 및 결론 (Data and Results) Ⅴ. 고찰 (Discssion) 1. 제 1 타입은 세포 전체 DNA(total cell DNA)이며 클로닝될 유전자를 얻기 위해 필요. 1-1. Total cell DNA의 분리 2. 제 2 타입은 순수한 플라스미드 DNA이며 분리방법은 기본적으로 total cell DNA분리와 같지만 어느 단계에서는 염색체 DNA와 분리되어야 한다. 2-1. 플라스미드 DNA의 분리 3. 제 3 타입은 파지 DNA이 며 파지 클로닝 벡터로 이용될 때 필요. 3-1. 박테리어파지 DNA의 분리 ※ 아가로스 젤 전기영동장치의 원리 ※ Agarose gel 전기영동시 DNA의 이동에 영향을 주는 요인들 ▶ 아가로즈(아가로스, Agarose) Ⅵ. 참고 문헌 (Reforence) ............................................................................................................................. Ⅱ. 서론 (Introduction) 1. PCR (polymerase chain reaction) PCR(polymerase chain reaction)은 1983년, K.B.Mullis가 고안한 것으로 특정염기서열을 증폭함으로써 DNA 염기서열 분석 및 현대 분사생물학의 발전을 가져왔다. PCR 방법에 가장 흔히 사용되는 DNA 중합효소(DNA polymerase)는 Taq 1 polymerase이다. 초기에는 E. coli polymerase를 사용하였으나 열에 불안정하여 각 cycle이 진행될 때 마다 효소를 첨가해주어야 하는 불편함이 있었다. 그래서 개발된 것이 75℃ 온천에서 분리한 세균 고도호열균(Thermus aquaticus)에서 얻은 DNA polymerase이다. Taq 1 polymerase는 75℃에서 최적으로 DNA를 합성하고 94℃에서도 안전성을 갖기 때문에 각 cycle 마다 효소를 첨가할 필요 없이 특정염기서열을 증폭할 수 있다. 1-1. PCR의 원리 PCR은 DNA의 원하는 부분을 증폭하는 방법이다. DNA 분자의 어느 부분이든지 경계배열(border sequence = 프라이머 염기서열)만 알면 PCR을 통해서 증폭할 수 있다. PCR은 DNA의 변성(denaturation), 프라이머의 결합(annealing), DNA의 신장(extension) 세 단계로 구성되어 있고, 이 과정을 반복하면서 DNA가 증폭된다. 기본적으로 PCR에 필요한 요소들에는 주형 DNA(DNA template), 프라이머(primer), 뉴클레오티드(dNTP), 중합효소(polymerase) 등이 있으며, PCR의 정확성을 결정하는데 가장 중요한 것은 프라이머와 온도이다.

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