해피레포트 - 생물학 실험 - 원형 DNA인 plasmid DNA

카테고리 : 레포트 > 의학계열 파일이름 :생물학 실험 - 원형 DNA인 pla.hwp 문서분량 : 3 page 등록인 : leewk2547 문서뷰어 : 한글뷰어프로그램 등록/수정일 : 15.04.21 / 15.04.21 구매평가 : 다운로드수 : 0 판매가격 : 1,200 원

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보고서설명
plasmid란? 세포 내에서 핵이나 염색체와 독립적으로 존재하면서 자율적으로 자가증식해 자손에 전해지는 유전요인이다. 1952년에 미국의 유전학자 J.레더버그가 세균류의 염색체 이외의 유전요인을 플라스미드라고 명명했는데, 최근에는 진핵생물도 포함해 세포질 인자와 같은 뜻으로 흔히 쓰인다.

본문일부/목차
<2>‘원심분리’란? 원심분리는 고체와 고체를 둘러싼 액체 간의 밀도차를 이용한다. 부유물이 있는 현탁액을 가만히 두면 밀집한 고체는 중력의 영향으로 서서히 가라앉게 되는데 이러한 과정이 침전 (sedimentation)이다. 서서히 침전되는 것을 원심력을 이용하여 가속하는 과정을 원심분리 (centrifugation)라 한다. 따라서 침전과 원심분리는 유사하다. 침전(sedimentation)에 비해 원심분리는 다음과 같은 장단점을 가지고 있다. 원심분리는 공정을 계속적으로 반복할 수 있고, 많은 양을 짧은 시간안에 처리할 수 있으며, 멸균상태에서 조업이 용이하다. 그러나 설치자본 및 유지비용이 많이 들며, 에너지 소모가 많고 슬러리(slurry) 형태의 농축 등이 문제점이 될 수 있다. 원심분리는 산업적으로 생물적 분리의 첫번째 단계로써 사용되어진다. 예를 들면 발효된 맥 주로 부터 불용성 물질을 제거하는 단계에서 사용된다. 이 방법은 0.2 ml의 적은 양에서부터 수천 리터에 이르기까지 가능하고 속도와 온도차를 5%의 오차에서 조절할 수 있다. 원심분리는 세포내 소기관의 분리 또는 세포내 물질 분리에도 이용된다. 그러나 세포내의 분자들을 구별하여 정제하는 것은 세포와 생산물을 분리하는 것 보다 더 힘들다. 그래서 원심분리는 DNA재조합기술의 발전과 함께 더욱 더 중요한 분리공정이 되어지고 있다. 재료 및 방법 <1> 재료 : 마이크로 피펫, 원심분리기, 마이크로 튜브, 피펫팁, SolⅠ, SolⅡ, SolⅢ, plasmid DNA(pGFPExp), 70%,100% 에탄올, DW <2>실험 방법 1. 1.5ml E-tube에 pGFPExp 배양액 1.5ml을 옮겨 담는다 2. 원심분리 한다.(14000rpm, 3min) 3. 상층액을 버리고 pGFPExp 배양액 1.5ml을 다시 한번 넣어주고 원심분리 한다. 4. 100㎕ SolⅠ을 첨가한 후 vertexing하여 pellet이 완전히 풀렸느지 확인한다. 5. SolⅡ를 제조 후, 200㎕를 첨가한다. 6. 5회 정도 inverting 실시 후, ice에 5분간 놔둔다. 7. 150㎕ cold SolⅢ를 첨가 후 원심분리 한다.

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