효소의 순도 검정법 정제된 효소의 순도를 검토하는 방법은 많으나 대개는 정제법에 쓰이는 방법을 정량화한 것이다. 따라서 최종의 조제품이 순수한 것을 엄밀히 결정하는 방법은 하나만 있는 것이 아니므로 적어도 두, 세가지 방법으로 그 순수성을 조사해야 한다. (1)활성 측정법 정제에 따라 단백질 단위 중량당의 활성(비활성)은 상승하는 것이 당연하나 이 값이 재결정을 반복하여도 일정하지 않으면 안된다. (2)물리적 방법 1. 초원심과 확산법 단백질 용액을 강한 원심력(초원심분리기, 65.000rpm)을 가하여 침강시키는 경우 분자량 또는 분자형 등에 의하여 침강속도가 달라진다. 이것을 광학적 수단으로 관찰하여 순도를 결정하는 방법이다. 즉 침강을 peak로 관측하여 그 peak의 모양, 폭, 대칭성, 시간에 따른 변화의 균일성 등으로 순도를 알 수있다. 2. 전기영동법 단백질은 일정의 전장에 놓이게 되면 영동을 일으켜 전하에 대응되는 이동도를 나타낸다. 이 이동도의 차를 이용하여 시료 중의 불순물의 유무를 판정하는 방법이다. 이온 경계면 전기영동은 Tiselius 의 장치가 가장 보편적이고 이온강도와 ph를 바꿔가면서 영동시켜 균일성을 검토한다. 근래 cellulose acetate, 녹말 한천, polyacrylamide gel 등을 지지체로 한 전기 영동법이 보급되고 있다. 특히 polyacrylamide gel 을 사용한 disk 영동법은 분리기능이 아주 우수하여 순도의 검정에 없어서는 안될 방법이다. 전기 영동법으로 단일성을 판정할 때는 여러가지 영동조건을 분석하여 판단을 신중히 하여야 한다. 3.크로마토 그래피법
이온교환체와 단백과의 상호작용은 정전결합 이외에 수소결합, 소수결합, 등이 있으며 순도 결정법으로 감도가 높은 방법이다. re 크로마토그래피를 하여 용출곡선이 한 개로 대칭인 peak 로 나타내는 것이 필요하다. 4.용해도법 단백질을 일정 용량의 용매를 가하면 ...
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