효소의 분리 정제에 있어서 중요한 것은 목적으로 하는 효소를 가능한 한 고수율로 그리고 생체내에 존재하고 있는 그 상태로 꺼내는 것이다. 이 때문에 추출 정제의 과정으로 효소의 변성, 수식과 실활은 가능한 한 피할 필요가 있다. 효소는 생체계 외로 꺼내게 되면 환경의 변화 때문에 불안정한게 되는 수가 많다. 이 의미로 정제는 먼저 목적으로 하는 효소를 안정화 시키는 조건이나 방법을 검토하여 두는 것이 중요하다. (1) 효소의 안정성 효소의 안정성은 효소의 종류에 따라 큰 차이가 있고 유형화하기에는 어려움이 많다. 일반적으로 세포외로 분비되는 효소는 안정성이 높고 세포내 효소는 실활이 쉽다. 효소의 안정성에 대하여는 효소 단백질의 변성과 함께 실활과 활성부위의 변화에 의한 실활로 대별된다. 후자는 광의의 저해이고 보기로서 활성부위에 활성 -SH기를 가진 효소는 정제 중에도 간혹 실활되기 쉬운 불안정한 효소이다. 이와 같은 효소를 화학수식 등의 기공을 행하는 경우는 -SH기를 미리 처리하여 실활시켜 두고 다음에 환원하여 활성화 시키는 방법을 취하고 있다. Dehydro-genase의 경우는 NaOH와 환원형 기질을 가하여 abortive ternary complex(불념형 복합체, 두 기질효소반응으로 한쪽의 기질과 다른쪽의 생성물이 결합하여 삼중합체를 형성하는 경구, 반응은 진행되지 않고 반응이 저해된다.)를 형성하면 가공시의 안정성을 증가시킬 수 있다. 세포외로 분비되는 효소는 일반적으로 안정하다. 대부분 monomer 효소이고 disulfide 결합에 의하여 가교구조를 가진 것이 많다. 그러나 안정성만으로 보아 monomer 일 것과 -s-s-결합을 가질 것이 안정성의 필연성은 아니고 호연성 생물에서 얻은 효소 oligomer 효소로 -s-s- 결합을 가지지 않는 것이라도 중온 생물의 대응하는 효소보다도 상당히 안정하다. 내열성 효소의 구조는 특수한 구조를 가진 것이 아니며 보통의 효소와의 안정성의 에너...
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