해피레포트 - 생물학실험 - DNA 추출, PCR의 원리 및 실험

카테고리 : 레포트 > 의학계열 파일이름 :생물학실험 - DNA 추출, PCR의.hwp 문서분량 : 5 page 등록인 : leewk2547 문서뷰어 : 한글뷰어프로그램 등록/수정일 : 13.11.29 / 13.11.29 구매평가 : 다운로드수 : 3 판매가격 : 2,000 원

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보고서설명
<실험 방법> -DNA 추출 1. Solution 1 2. Solution 2 3. Solution 3 4. Washing 5. Elution -PCR 1. PCR tube에 dNTPs buffer 4 μl와 reaction buffer 5 μl를 넣는다. 2. Template DNA 1 μl를 넣고 forward, reverse primer를 각각 0.5 μl 씩 넣는다. 3. DNA polymerase 1 μl를 넣는다. 4. 증류수 37 μl를 넣고 잘 pipetting 해 준다. 5. PCR machine의 well에 tube를 넣고 반응시킨다.

본문일부/목차
Solution I 에 들어있는 EDTA가 세포벽의 Calcium ion을 제거하여 세포벽을 무너뜨린다. 하지만, 세포가 완전히 무너지면 DNA가 모두 빠져나오게 되므로 Solution I 에 있는 glucose가 삼투압을 유지시켜주어 세포의 외형을 유지시켜준다. 때에 따라선 lysozyme을 쓰기도 한다. 그 후 Solution II를 넣어주는데 Solution II 에 들어있는 SDS는 ionic detergent (계면활성제) 이다. Vortexing 같은 처리릏 해주어서 세포가 완전히 깨지게 되면 Chromosomal DNA가 잘게 잘게 부서져서 Plasmid DNA와 구분이 어렵기 때문에 SDS를 이용한다. Solution II는 NaOH가 들어 있는 Alkali 용액이다. Alkali 용액에서 DNA가 Denaturation 되는 성질을 이용하여 DNA를 Denaturation 시키게 되는데 Supercoiling 된 Plasmid DNA는 꽁꽁 묶여 있기 때문에 Solution II의 Denaturation 과 Solution III의 Naturation 에 큰 영향을 받지 않는다. 그 후 Solution III를 넣어 Renature 시킨다. 위와 마찬가지로 Plasmid DNA는 큰 영향을 받지 않게 되나 Chromosomal DNA 는 Linear 형태로 존재하기 때문에 Renature 되는 과정에서 SDS와 Potassium 이 같이 엉키게 된다. 그 후 원심분리를 하게 되면 상층액의 Plasmid만 남게 된다. ■ PCR의 기본 원리 ※ PCR (polymerase chain reaction) : DNA 또는 RNA의 특정 영역을 시험관 내에 대량으로 증폭 가능한 기술 ● PCR 증폭호흡에 영향을 미치는 요인 ⅰ) 각 단계의 방응온도와 시간 ⅱ) cycle 수 ⅲ) 반응액 조성 (주형 DNA , dNTP농도 , Mg2+ 농도 등) ⅳ) primer 설계 ⅴ) 사용 DNA polymerase ⅵ) 기타 : 몇 가지 반응 첨가물 (DMSO , 비이온 계면 활성제 , 글리세를)에 따라 반응촉진 효과

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