생화학에서 사용되는 기초 실험들에 대한 상세한 설명을 수록하였습니다. 생화학 실험에 대한 개념 잡기에 아주 유용한 요약본입니다.
본문일부/목차
목차
∙ Amino Acid Titration
∙ Protein 정량분석 (뷰렛법/로우리법)
∙ Protein Seperation & Purification
∙ SDS-PAGE
∙ Enzyme Assay
∙ Bacterial Transformation
∙ The Preparation of Genomic DNA & Plasmid DNA from Bacteria
∙ Physical Properties of DNA
∙ Southern Blotting
∙ Carbohydrate 정성분석
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본문내용
다. 단백질의 정제법
단백질을 추출, 가용화 한후에는 단백질의 정제법에 따라 정제를 행해야 한다. 앞에서 설명한 것처럼 단백질의 여러 고유한 성질에 따라 정제법이 나뉘어지는데 크게 다음과 같이 나누어진다.
① 용해도의 차를 이용
② 선택적 변성법
③ 흡착법
④ 액상 Chromatography 법
⑤ Electrophoresis
이들 방법 중에서 실제로 단백질 정제에 있어서 널리 사용되는 몇 가지의 방법의 원리를 알아보도록 하자.
- Salting-Out Method (염석법:鹽析法) : 단백질은 특유한 Salting-Out Point, 즉 일정한 염 농도에 이르면 침전되는 성질을 지니고 있다. 즉(NH4)2SO4 와 같은 염 농도를 증가시켜서 분별침전을 얻을 수 있다.
이 방법으로 얻어진 단백질 침전은 대개 2,3개의 단백질이 섞여 있는 혼합물로써 존재한다. 따라서 이후에 또 다른 방법으로 정제를 해야 한다는 불편함이 따르나 여러 단계에 걸친 단백질 정제 과정의 초기 단계에서 널리 사용된다.
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가. Electrophoresis의 기본 원리
Electrophoresis란 전기장 안에서 하전된 입자가 양극 또는 음극 쪽으로 이동하는 현상을 말한다. 이때 이동하는 속도는 입자의 전하량, 크기와 모양, 용액의 pH와 점성도 (Viscosity), 용액에 있는 다른 전해질의 농도와 이온의 세기, 지지체의 종류 등 여러가지 요인에 의해 결정된다. 따라서 어떤 용액에서의 하전된 알맹이의 이동속도는 분자 자체의 성질에 따라서 결정된다. 따라서 Electrophoresis는 Amino Acid, Nucleotide, Protein등과 같이 하전된 물질을 분리 / 분석하는데 매우 유용한 Tool이 될수 있다.
전기장의 세기가 1volt / cm 일 때의 어떤 입자의 이동속도를 전기이동도 (Electrophoretic mobility:μ)라고 한다. 전하 q를 가진 입자가 전류의 세기 E 인 전기장에 있을 경우 전기 이동도는 다음과 같이 정의될 수 있다.
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