해피레포트 - [의학/일반생물학] 4. Macromolecules: Proteins, Carbohydrates, Lipids

카테고리 : 레포트 > 자연과학계열 파일이름 :4[1] Macromolecules (Protein, Lipid, Carbohydrate).hwp 문서분량 : 5 page 등록인 : fantastic38 문서뷰어 : 한글뷰어프로그램 등록/수정일 : 08.05.22 / 08.05.22 구매평가 : 다운로드수 : 8 판매가격 : 1,000 원

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보고서설명
일반생물학 및 실험1에서 쓴 레포트입니다. 거대분자의 관찰에 관한 레포트입니다.

본문일부/목차
목차: 1. 실험 목적 2. 실험 원리 3. 실험기구 및 재료 4. 실험 방법 5. 실험 결과 및 토의 1) STD 흡광도 측정 2) 미지의 protein 용액, 우유의 실험 3) 25μl의 측정오차에 대하여 4)Further Study 6. Reference 본문: 1. 실험목적 세포를 이루고 있는 생체 거대분자의 존재를 생화학적인 실험 방법을 통해서 확인하고 이들의 양을 정량 하는 기술을 습득한다. 2. 실험원리 Bradford Method: 단백질에 발색제를 가하여 가시광선 영역의 흡광도를 측정하는 정량법이다. 산성용액에서 Coomassie Brilliant Blue 염료는 단백질과 결합하게 되고, 이로 인해 염료의 최대흡광도는 465nm에서 595nm로 이동하게 된다. 595nm에서의 흡광도는 단백질의 농도와 비례하므로 정량이 가능하게 되는데, 이 방법은 발색 반응이 2분이내에 완결되며 1시간까지 안정성이 유지된다. Bradford 방법의 감도는 Lowry 방법보다 좋으며, 미량 정량법(microassay)을 사용하면 1~20mg의 단백질량을 측정할 수 있다. Bradford 방법은 빠를 뿐만 아니라 비단백질 성분들에 의한 방해도 거의 없다. 몇 가지 방해성분이 있으면 결과가 정확하지 않게 되는데, 알려진 방해성분으로는 Triton X - 100 과 황산도데실나트륨(SDS)이 있다. 3. 실험기구 및 재료 1) Protein reagent (Bradford reagent) -50 ml의 95% 에틸알코올에 100 mg의 Coomassie Brillant Blue G-250을 녹인다. -여기에 85% phosphoric acid 100 ml을 넣고 잘 섞는다. -증류수를 넣어서 총량이 200 ml이 되게 한다 (이 농축 염색약은 4 ℃에서 약 6개월 동안 보관가능). 실제 시료에 넣는 염색약은 중류수 4 volume을 넣은 희석 염색약을 사용한다. 2) Protein Standard -BSA (Bovine Serum Albumin, Sigma)을 농도가 1 mg/ml이 되게 만든다. 3) Spectrophotometer와 Quartz cuvettes. 4) Milk, Unknown Protein 4. 실험 방법 1) 단백질의 양을 알고 있는 standard solution (1 mg/ml BSA, bovine serum albumin)을 0, 5, 10, 15, 20, 25μl씩 분주한다. 2) 1)에 물 1000㎕와 Bradford reagent를 500㎕ 넣고 천천히 섞어준다. 3) 단백질 양을 모르는 unknown protein과 milk를 각각 5, 10, 20㎕씩 분주하고 ⑵를 반복한다. 4) 발색이 되도록 약 5분 정도 기다린다 (단, 30분을 넘지 않는다). 5) 595 nm의 파장에서 먼저 standard solution의 흡광도를 측정하여 기록하고, 시료의 흡광도를 측정, 기록한다. 6) Standard의 흡광도 수치를 이용하여 standard curve를 그리고 이 curve 에 맞추어 모르는 시료 안의 단백질의 양을 거꾸로 계산한다.

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