▣ 아미노산 서열 결정 ▣ƒ. 산 가수분해.ˆN HCl, 110℃에서 24시간 동안 가열.
펩티드 결합이 끊어지고 각각의 아미노산 유리.
이온- 크로마토그래피
종이- 크로마토그래피
아미노산의 종류와 구성비를 알 수 있다.„. 아미노(N) 말단의 아미노산 결정.
DNFB 또는 Sanger 시약.
(2,4-dinitrofluorobenzene)
아미노 말단의 아미노산을 DNP-아미노산 형성.…. Carboxy(C) 말단의 아미노산 결정.
Carboxypeptidase 라는 enzyme을 사용한다.
Carboxypeptidase A 말단 아미노산을 대부분 분리.
Lys, Arg, Pro 기가 C 말단에 있으면 분리 불가능.
Carboxypeptidase B Lys, Arg 일 때 분리.
Carboxypeptidase C Pro 일 때 분리.
화학적 방법
Hydrazine 으로 처리하면 peptide bond 파괴.
아미노 아실 hydrazide 와 C-말단 아미노산.†. 펩티드의 선택적 분리.
특정부위의 펩티드 결합을 끊는 효소나 약품사용.
처리 효소나 시약끊어지는 부위 Carbonyl 기TrypsinLys, ArgChymotrypsinPhe, Tyr, TrpS. aurens Vg proteinsGluCyanogen BromideMet ‡. Edman 분해법.
잘게 잘라진 polypeptide 사슬은 자동 서열결정.
예제 1. 폴리펩티드 사슬 내의 아미노산 서열결정.ƒ) 산 가수분해를 통해 다음과 같은 아미노산의 존재를 확인했다.
(Ala, Arg, Cys, 2Glu, Gly, Ile, 2Lys, 2Met, Ser, Trp, Tyr, Val)„) DNFB 시약 (Sanger 시약)과 반응하는 아미노산은 Ala 였다.
- 전체 폴리펩티드 중에 Ala 이 가장 앞에 위치한다.…) Carboxype...
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