유전공학에 의해 미생물로부터 효소를 대량으로 생산하는 방법을 구체적으로 설명하시오. 오늘날 이용되고 있는 효소의 대부분은 미생물 기원의 것이다. 미생물 기원의 효소로는 ①값싼 원료로서 대량배양이 가능하고 ②배양이 단시간으로 관리가 쉽고 ③많은 종류의 효소를 합성하는 능력이 있으므로 목적에 알맞는 효소의 취득이 쉽고 ④생산균주의 개량이 용이한 것 등이 이점이 있다. 보통 미생물효소의 생산에 있어서는 우수한 생산균주를 자연계에서 선별하여 그의 유전적 성질을 개량함으로써 목적에 알맞는 균주를 육성하는 방법을 취하고 있다. 균주개량은 돌연변이, 세포내 유전자 재조합, 실험관내 유전자 재조합 등의 방법이 있다. 보통 미생물 효소의 합성은 여러 가지 조절을 받고 있다. 일차대사에 관여하는 생합성계 효소의 합성은 최종산물에 의하여 조절 즉 feedback 억제를 받고 있다. 한편 이차대사에 관여하는 분해계 효소의 합성은 유도 catabolite억제, 질소억제 등의 조절을 받고 있다. 그래서 특정 효소를 대량으로 생산시키는 데는 이와 같은 조절 기구의 해체가 필요하다. 변이에 의한 조절을 해체하고, 또 다시 변이를 세포내 유전자 재조합에 의하여 조합시켜 효소생산을 증강시킬 수 있다.
1) Bacillus subtilis 당화형 α-amylase유전자의 클로닝에 의한 방법 고초균 당화형 α-amylase유전자는 α-amylase 아미노산 배열에 대응하는 효소 구조유전자와 발현에 관여하는 생산제어유전자로 구성되어 있다. 고초균 당화형 α-amylase유전자중 가장 분자량이 큰 α-amylase를 생산하는 amyEm`을 염색체 DNA중에 함유하는 Bacillus subtilis NA64 균주를 돌연변이 유발제(NTG)로 처리하여 많은 종류의 α-amylase 변이균주를 얻는 방법을 사용한다. 생산제어유전자를 각각 별개의 유전자에 도입하면 α-amylase의 생산량은 2∼5배 증대한다. 복수의 생...
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